ABSTRACT
Infertility or subfertility in bovine males may be related to spermatic microRNAs (miRNAs), whose function seems to be associated with the regulation of gene expression, degradation orstorage of messenger RNAs (mRNAs) for later translation into early embryonic development. Thus, the purpose of this study was to identify differentially expressed miRNAs in semen samples from bulls (Bos taurus) with low and high efficiency in the in vitro embryo production (IVEP) and to evaluate if they can be used as markers of semen efficiency for IVEPs. In order to identify miRNA markers of semen efficiency in thein vitro embryo production, eight semen samples from each animal, one bull with high and two bulls with low efficiency in IVEPs were used to perform the RNAseq technique for miRNAs. Initially the samples were washed with PBS to remove the extender semen and subsequently were submitted to RNA extraction protocols performed according to procedures described by mirVana™ miRNA Isolation Kit. Then, the amplification of the miRNAs was carried out, not to mention the preparation of the library (Ion Total RNA-Seq Kit v2), the PCR emulsion reaction, enrichment, as well as the injection of the sample on the chip by the Ion Chef equipment. The sequencing was done on Ion Proton equipment. The comparison between the samples was established using two methodologies for searching for targets to increase the robustness of the analytical procedure: the miRanda program using as cutoff minimum free energy of the hybridization -20 kcal/Mol, 100% of identity between nucleotides 2 and 8 of the miRNA, and the RNAhybrid program, using as cutoff minimum free energy of hybridization -20 kcal/mol. In sum, 1306 miRNAs were identified in the samples. The bta-miR-380-5p, bta-miR-155, bta-miR-30c and bta-miR-34a genes were identified by the Bioinformatics as being strongly differentially expressed between the groups, indicating that these genes may present themselves as possible efficiency markers. However, it has become clear that there is no single miRNA that marks different types and causes of fertility problems.
A infertilidade ou subfertilidade em machos bovinos pode estar relacionada a microRNAs espermáticos (miRNAs), cuja função parece estar associada à regulação da expressão gênica, degradação ou armazenamento de RNAs mensageiros (mRNAs), para posterior tradução no desenvolvimento embrionário inicial. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar miRNAs diferencialmente expressos em amostras de sêmen de touros (Bos taurus) com baixa e alta eficiência na produção in vitro de embriões (PIVE) e avaliar se eles podem ser utilizados como marcadores de eficiência do sêmen em PIVEs. Para identificar miRNA marcadores da eficiência de sêmen em PIVE, oito amostras de sêmen de cada animal, sendo um touro com alto e dois touros com baixa eficiência, foram utilizados para realizar a técnica de RNAseq para miRNAs. Inicialmente as amostras foram lavadas com PBS para remover o diluente do sêmen e, posteriormente, foram submetidas a protocolos de extração de RNA realizados de acordo com os procedimentos descritos pelo Kit de isolamento de miRNA mirVana ™. Em seguida, foi realizada a amplificação dos miRNAs, a preparação da biblioteca (Ion RNA-Seq Kit v2), a reação de emulsão de PCR, enriquecimento e a injeção das amostras no chip apropriado utilizando o equipamento Ion. Chef. O sequenciamento foi realizado no equipamento Ion Proton. A comparação entre as amostras foi estabelecida utilizando duas metodologias de busca de alvos para aumentar a robustez do procedimento analítico: o programa miRanda utilizando como valor de corte a energia mínima livre de hibridização -20 kcal / Mol e 100% de identidade entre os nucleotídeos 2 e 8 do miRNA, e o programa RNAhybrid, utilizando como valor de corte a energia mínima livre de hibridização -20 kcal / mol. Em suma, 1306 miRNAs foram identificados nas amostras. Os genes bta-miR-380-5p, bta-miR-155, bta-miR-30c e bta-miR-34a foram identificados pela bioinformática como sendo fortemente diferencialmente expressos entre os grupos, indicando que esses genes podem se apresentar como possíveis marcadores de eficiência. No entanto, ficou claro que não existe um único miRNA que marque diferentes tipos e causas de problemas de fertilidade.
Subject(s)
RNA , Cattle , Embryo Research , InfertilityABSTRACT
Os efeitos bactericidas do ozônio têm sido estudados para sua utilizaçäo prática na desinfecçäo, devido ao seu alto poder oxidante. Foram colhidas 49 amostras de leite bovino "in natura", obtido por ordenha mecânica. As amostras foram separadas em 03 frascos de 250ml, acondicionadas em caixa de isopor contendo gelo e remetidas para o laboratório de Doenças da UFU, onde um dos frascos serviu como controle, o outro submetido à ozonizaçäo por 5 minutos, e o terceiro foi ozonizado por 10 minutos. Foram feitas provas físico-químicas, determinando a densidade, gordura e acidez do leite. O tratamento estatístico utilizado para análise dos resultados foi o teste de diferença de duas médias envolvendo a distribuiçäo normal, ao nível de significância 0,05. Os resultados obtidos para a densidade demonstraram que o grupo controle supera significativamente os teores de densidade dos grupos ozonizados por 5 (grupo 1) e 10 minutos (grupo 2). Observou-se também que os valores de densidade foram superiores no grupo tratado 1 comparados ao grupo tratado 2. Os resultados obtidos para os teores de gordura demonstraram que o grupo controle supera significativamente os teores de gordura dos grupos tratados 1 e 2. O grupo tratado 1 näo supera significativamente os teores de gordura do grupo tratado 2. Com relaçäo à acidez, os resultados nos mostraram que nos 3 grupos näo houve diferenças significativas quando comparados uns aos outros. Conclui-se que, apesar de apresentarem diferenças significativas entre as variáveis analisadas, os valores encontrados sempre estiveram, na sua média, dentro dos padröes mínimos exigidos pelo Ministério da Agricultura.
Subject(s)
Milk , Ozonation , Food AnalysisABSTRACT
Verifica a influência do gás ozônio sobre a microbiota do leite bovino "in natura", foram analisadas microbiologicamente 49 amostras. Após serem submetidas à ozonizaçäo (borbulhamento) por 5 e 10 minutos, foram semeadas em placas de Petri contendo meio agar padräo (APC), incubadas em estufa a 370 C por 48 horas e contadas no Contador de Colônias de Quebec. Mediu-se o índice de pH e a temperatura das amostras antes e após a ozonizaçäo. O número de UFCs observado após ozonizaçäo por 5 e 10 minutos foi significativamente inferior em relaçäo ao grupo controle, näo havendo diferença estatisticamente significativa entre os tempos de 5 e 10 minutos. Os índices de pH antes e após ozonizaçäo näo revelaram diferenças estatisticamente significativas. As temperaturas após a ozonizaçäo apresentaram um aumento médio significativo, sendo de maiores proporçöes após ozonizaçäo por 10 minutos. Concluiu-se que o ozônio apresentou açäo bactericida eficiente sobre o número de UFCs semelhantemente para o tempo de 5 ou de 10 minutos; os índices de pH do leite näo se alteraram após ozonizaçäo e as temperaturas sofreram acréscimos sem prejuízo das propriedades bactericidas do gás. Indicou-se o tempo de ozonizaçäo por 5 minutos, como sendo o ideal, para as quantidades de leite analisadas.
Subject(s)
Milk/microbiology , OzonationABSTRACT
Quarenta amostras de leite bovino "in natura" foram submetidas à ozonizaçäo por borbulhamento durante 5 e 10 minutos e, em seguida, mensuraram-se os níveis de ozônio residual por técnica preconizada pela APHA, 1980. Foram observados índices médios de 0,0001751 mg/l e 0,0002055 mg/l de ozônio, respectivamente, para os tempos de 5 e 10 minutos de borbulhamento. Conclui-se ser a técnica adequada para a dosagem e que os índices de ozônio residual encontrados nas amostras sempre estiveram dentro dos limites permitidos, e tidos como inócuos para a saúde humana pela literatura consultada.